PCR PARA NEUMONÍA

Tema: Detección por PCR múltiple de gérmenes atípicos en pacientes con neumonía adquirida de la comunidad

Objetivos: 
- Detectar  del agente causal de forma más rápida y sensible, sobre todo en el caso de los patógenos difíciles de cultivar.  
- Permitir  la detección de los microorganismos analizados en las muestras, mostrando las mejores perspectivas en sensibilidad para el diagnóstico microbiológico 

Tipo de muestra biológica: Secreción faríngea, lavado broncoalveolar y esputo

Tipo de ácido nucléico a ser extraído: ADN viral y ARN viral

Gen a amplificar: 16S rRNA, OMP o la proteína 60-kDa rica en cisteína

Tipo de PCR: PCR múltiple 

Visualización: Se realizó diluciones seriadas de las soluciones de los plásmidos control previamente cuantificadas por espectrofotometría ultravioleta. Dichas diluciones fueron sometidas a amplificación empleando los protocolos de PCR estandarizados. En el caso de M. pneumoniae, C. pneumoniae y L. pneumophila el límite de detección fue respectivamente de 0,050 ng/µL, 0,058 ng/µL y 0,001 ng/µL . 

El uso de las mismas diluciones de plásmidos control en la PCR múltiple permitió observar la obtención de productos específicos para cada microorganismo, así como la ausencia de reacciones cruzadas entre los mismos, sin embargo se observó una disminución en el límite de sensibilidad de la detección para M. pneumoniae (0,075ng/µL) y C. pneumoniae (0,1 ng/µL), probablemente asociada al hecho de precisar 57ºC en la fase de hibridación de primers con la finalidad de favorecer la especificidad de unión.

REFERENCIAS:

Guillén R, Franco R, FrancoL. [Internet].  Detección por PCR múltiple de gérmenes atípicos en pacientes con neumonía adquirida de la comunidad que concurrieron al INERAM. [actualizado en junio de 2012; acceso el 27 de noviembre de 2016]. Disponible en: http://scielo.iics.una.py/scielo.php?pid=S1812-95282012000100004&script=sci_arttext