Tema: Detección por PCR múltiple de gérmenes atípicos en pacientes con neumonía adquirida de la comunidad
Objetivos:
- Detectar del agente causal de forma más rápida y sensible, sobre todo en el caso de los patógenos difíciles de cultivar.
- Permitir la
detección de los microorganismos analizados en las muestras, mostrando las
mejores perspectivas en sensibilidad para el diagnóstico microbiológico
Tipo de muestra biológica: Secreción faríngea, lavado broncoalveolar y esputo
Tipo de ácido nucléico a ser extraído: ADN viral y ARN viral
Gen a amplificar: 16S rRNA, OMP o la proteína 60-kDa rica en cisteína
Tipo de PCR: PCR múltiple
Visualización: Se realizó diluciones seriadas de las soluciones de los plásmidos control
previamente cuantificadas por espectrofotometría ultravioleta. Dichas
diluciones fueron sometidas a amplificación empleando los protocolos de
PCR estandarizados. En el caso de M. pneumoniae, C. pneumoniae y L. pneumophila el límite de detección fue respectivamente de 0,050 ng/µL, 0,058 ng/µL y 0,001 ng/µL .
El uso de las mismas diluciones de plásmidos control en la PCR múltiple
permitió observar la obtención de productos específicos para cada
microorganismo, así como la ausencia de reacciones cruzadas entre los
mismos, sin embargo se observó una disminución en el límite de
sensibilidad de la detección para M. pneumoniae (0,075ng/µL) y C. pneumoniae (0,1
ng/µL), probablemente asociada al hecho de precisar 57ºC en la fase de
hibridación de primers con la finalidad de favorecer la especificidad de
unión.
REFERENCIAS:
